Принцип работы секвенатора GS Junior
Процесс пиросеквенирования
А: ДНК фрагментируется, к фрагментам пришиваются т.н. адаптеры; полученные двуцепочечные молекулы ДНК разделяются на две комплементарные цепи.
Б: Одноцепочечные молекулы ДНК прикрепляются к микро-бусинкам. Отдельные бусинки заключаются в капли реакционной смеси, капли масляной эмульсии.
В: После разрушения эмульсии микро-бусинки, несущие пришитыми на своей поверхности миллионы одноцепочечных копий первоначального фрагмента ДНК, помещаются в лунки оптико-волоконного слайда (т.н. пикотитровальной пластинки), по одной в каждую лунку. Каждая лунка оптико-волоконного слайда формирует отдельный пиколитровый «реактор», в который попадает одна бусинка с ДНК-матрицей и в котором осуществляется реакция секвенирования. Объём каждой лунки составляет 75 пиколитров. Плотность размещения лунок на поверхности пластинки 480 лунок на квадратный миллиметр.
Г: В каждую лунку добавляются бусинки меньшего размера, несущие на своей поверхности ферменты, необходимые для пиросеквенирования.
Д: Микрофотография эмульсии, изображающая «пустые» капли и капли, содержащие бусинки с ДНК-матрицей. Толстая стрелка указывает на 100-мкм каплю, тонкая на 28-мкм бусинку.
Е: Микрофотография фрагмента пикотитровальной пластинки, полученная при помощи сканирующего электронного микроскопа.
Затем оптико-волоконный слайд помещается в проточную камеру таким образом, что над отверстиями лунок создаётся канал по которому в лунки поступают необходимые реактивы. Добавление и удаление реагентов и продуктов реакции происходит за счёт процессов конвекционного и диффузионного переносов.
Более подробная информация об устройстве и принципах работы пиросеквенаторов производства компании Roche можно ознакомиться на соответствуюзих сайтах
